los hibridación in situ es un método para detectar aberraciones cromosómicas. Ciertos cromosomas están marcados con tintes fluorescentes y unidos a una sonda de ADN. Esta técnica se utiliza para el diagnóstico prenatal de mutaciones genéticas.
¿Qué es la hibridación in situ?
En el caso de la hibridación in situ o el Hibridación in situ fluorescente Los ácidos nucleicos de ARN o ADN se detectan en ciertos tejidos o en una célula mediante métodos genéticos moleculares. Por lo general, este tipo de diagnóstico se usa para detectar una anomalía cromosómica estructural o numérica durante el embarazo.
Para ello, se utiliza una sonda fabricada artificialmente, que a su vez consiste en ácido nucleico. Luego se une a los ácidos nucleicos del organismo mediante el apareamiento de bases. Este enlace se entiende por el término hibridación. La evidencia se basa en la estructura viva del paciente y, por lo tanto, corresponde a la evidencia in situ. Esto debe distinguirse de los métodos in vitro en los que la detección tiene lugar en el tubo de ensayo. El método fue desarrollado en el siglo XX por los científicos Joe Gall y Mary Lou Pardue.
La tecnología ha evolucionado desde entonces. Si bien en ese momento se usaban sondas radiactivas, por ejemplo, en la actualidad se usan sondas marcadas con fluorescencia con un enlace covalente a las moléculas marcadoras.
Función, efecto y objetivos
La hibridación in situ se usa generalmente para detectar aberraciones cromosómicas, es decir, anomalías cromosómicas que no se pueden detectar en un cariograma. Por lo tanto, el método siempre se utiliza cuando se deben determinar enfermedades hereditarias durante el embarazo.
Dado que las aberraciones cromosómicas son un problema que no debe subestimarse en la actualidad, el uso del método ha aumentado con el tiempo. La hibridación tiene lugar utilizando células nativas del líquido amniótico de la madre. La base de la técnica es la unión de la sonda marcada con colores a las partes del ADN. Gracias a la encuadernación, el número de copias se puede evaluar posteriormente con un microscopio, ya que las copias individuales emiten una señal de luz y, por lo tanto, se pueden hacer visibles bajo el microscopio. Existen diferentes procedimientos. O el análisis tiene lugar inmediatamente después de la unión.
En este caso, se utiliza un tinte fluorescente como la biotina, que se une directamente a la sonda de ADN. Con el método indirecto de hibridación in situ, la evaluación no puede tener lugar inmediatamente después de la hibridación, ya que las sustancias fluorescentes solo pueden unirse a la sonda después de la hibridación. Este método indirecto se usa con más frecuencia que el directo porque se cree que es más sensible. Además de las sondas de ADN centrométricas específicas de cromosomas, también hay sondas de ADN específicas de locus, sondas de biblioteca de ADN específicas de cromosomas e hibridaciones genómicas comparativas.
Las sondas de ADN del centrómetro cromosómico específicas se pueden utilizar para detectar anomalías numéricas cromosómicas. Esto significa que se utilizan principalmente cuando existe la sospecha de cromosomas duplicados o eliminados. Las sondas de ADN específicas de la ubicación son particularmente adecuadas para la detección de mutaciones mínimas que no se pueden detectar en el cariograma. En particular, se utiliza una sonda de biblioteca de ADN específica de cromosomas para detectar inserciones y translocaciones.
La hibridación comparativa del genoma, por otro lado, es un análisis completo de pérdidas y ganancias en material cromosómico. Hoy en día, la hibridación in situ es muy importante en el diagnóstico de diversas mutaciones cromosómicas.En el diagnóstico del síndrome de Down, las sondas se unen, por ejemplo, al cromosoma 21. Para ello, generalmente se utilizan sondas cromosómicas específicas, que pueden utilizarse si se sospecha de esta enfermedad.
Puede surgir una sospecha, por ejemplo, si los padres han dado a luz previamente a un niño con la enfermedad y la imagen de la ecografía es anormal. Si hay un triple enlace en lugar de un doble enlace y, por lo tanto, se emite una señal de triple color, el diagnóstico se considera confirmado.
Riesgos, efectos secundarios y peligros
A diferencia de la PCR, por ejemplo, la hibridación in situ es significativamente menos susceptible a la contaminación. Además, el tiempo necesario para el proceso es considerablemente menor. Sin embargo, debido a que los embriones en particular forman patrones cromosómicos, el resto de la distribución cromosómica y, por lo tanto, el estado genético de otras células no se puede inferir de un patrón dado.
Las señales de color también pueden superponerse o permanecer invisibles por otras razones. Como resultado, la hibridación in situ como herramienta de diagnóstico durante el embarazo es relativamente propensa a errores. Pueden surgir diagnósticos erróneos y los padres pueden decidir no tener un embrión sano. Para reducir la susceptibilidad a errores de hibridación in situ, deben examinarse simultáneamente al menos dos células embrionarias. Al examinar dos células en paralelo, ahora solo existe un riesgo insignificante de diagnóstico erróneo.
En tal caso, los padres pueden confiar absolutamente en el diagnóstico. La hibridación in situ no se ofrece a todas las mujeres embarazadas, sino solo a las mujeres de un grupo de riesgo. Sin embargo, a las mujeres embarazadas no se les niega este tipo de diagnóstico a petición propia. Los resultados anormales de la ecografía o un suero anormal pueden inducir al médico a ofrecer el procedimiento de diagnóstico. Aunque una gran parte, pero no todas, de las aberraciones cromosómicas se pueden diagnosticar mediante hibridación in situ.
Por lo tanto, la hibridación in situ nunca debe realizarse sola, sino que debe usarse siempre junto con una prueba de cromosomas convencional. El cuidado de la mujer embarazada juega un papel importante en este procedimiento. Antes del análisis, hay una discusión fundamentada con la futura madre sobre el método de diagnóstico, que explica los riesgos, las posibilidades y los límites de la tecnología.
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